通过优化加热溶液和卵细胞供体年龄,改进了老鼠卵巢的玻璃化和加热协议
Naomi Nakagata1, Satohiro Nakao2, Nobuyuki Mikoda1,3
1Division of Reproductive Biotechnology and Innovation, Center for Animal Resources and Development, Institute of Resource Development and Analysis, Kumamoto University, Kumamoto, Japan.
PloS one
|September 8, 2025
概括
使用特定的糖度和捐赠者年龄优化在试管婴儿中受精的老鼠胚胎的冷保存,提高了它们的生存能力和发育能力. 这种增强的协议可以通过CRISPR-Cas9技术有效地产生转基因大鼠.
科学领域:
- 生殖生物学 生殖生物学
- 发展生物学 发展生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
背景情况:
- 基因改造的老鼠对研究至关重要,通常是使用zygotes创建的.
- 在体外受精 (IVF) 的老鼠胚胎表现出较低的冷耐受性和发育潜力,而不是在体内受精的胚胎.
- 改善试管婴儿胚胎胚胎冷保存对于有效的小鼠基因改造至关重要.
研究的目的:
- 为了优化试管婴儿老鼠胚胎的玻璃化和变暖协议.
- 评估保温溶液中的糖度和卵细胞供体年龄对胚胎活力和发育的影响.
- 评估使用改进的冷保存协议生成转基因大鼠的效率.
主要方法:
- 使用不同度的糖糖 (0-0.3M) 进行试管婴儿老鼠肉细胞的玻璃化和加热.
- 评估胚胎的生存能力和发育速度到双细胞阶段.
- 胚胎移植以评估温暖后的发育能力.
- 使用CRISPR-Cas9针对Tyr基因的玻璃化加热生殖细胞的基因组编辑.
主要成果:
- 一个0.1M的糖糖加热溶液显著提高了玻璃化加热的胚胎的存活率和双细胞发育.
- 较年长 (6-7周) 的雌性大鼠的卵巢与较年轻 (3周) 的雌性大鼠相比,显示出更好的冷耐受性和发育能力.
- 经过玻璃化加热的胚胎细胞的基因组编辑后,优化的协议使幼的突变效率达到86.5%.
结论:
- 优化的玻璃化和升温协议显著提高了试管婴儿大鼠胚胎的冷耐受性和发育潜力.
- 卵细胞捐赠者的年龄是影响胚胎冷生存和发育能力的关键因素.
- 这种改进的协议有效地保护和生产转基因大鼠,增强了CRISPR-Cas9的应用.
