在小鼠胚胎早期发育过程中,通过时间缩短显微镜成像和量化单细胞CDK活性水平的协议

科学领域:

• 发展生物学 发展生物学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 在胚胎早期发育过程中,单细胞中的蛋白质活性量化是具有挑战性的.
• 循环素依赖激酶 (CDK) 是植入前胚胎细胞周期的关键调节者.

研究的目的:

• 为测量小鼠植入前胚胎单细胞中循环林依赖激酶 (CDK) 活性提供详细的协议.
• 为了使研究人员能够在早期胚胎发育过程中跟踪CDK活动动态.

主要方法:

• 使用基于光的报道器进行CDK活动.
• 采用体外培养策略,对老鼠胚胎进行实时成像.
• 实现实时光共聚焦显微镜用于图像采集.
• 开发用于细胞跟踪和数据分析的计算工作流程.

主要成果:

• 该协议允许在单细胞水平上量化CDK活动.
• 描述了有效的实时成像和细胞跟踪策略.
• 详细介绍了一个全面的图像分析工作流程,用于处理和可视化.

结论:

• 这种方法简化了测量开发小鼠胚胎中的CDK活动的复杂任务.
• 该协议促进了在植入前发育过程中研究细胞循环调节的研究.
• 这种方法为CDKs在早期胚胎发生过程中的作用提供了宝贵的见解.