开发和验证一种基于LC-MS/MS的新型蛋白质组学方法,用于定量视网醇结合蛋白4 (RBP4) 和转素 (TTR)

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 临床化学 临床化学

背景情况:

• 视网醇结合蛋白4 (RBP4) 和甲蛋白 (TTR) 对视网醇的运输和潜在的心脏代谢疾病生物标志物至关重要.
• 目前的RBP4量化方法缺乏同时测量TTR和绝对量化.

研究的目的:

• 开发和验证一种液体染色学-并联质谱法 (LC-MS/MS) 方法,用于同时绝对量化RBP4和TTR.
• 评估这种方法在健康个体和糖尿病病患者中的临床效用.

主要方法:

• 开发一种LC-MS/MS测定方法,使用代用,纯化蛋白质作为标准,重标签作为内部标准.
• 验证该方法在临床相关度范围内的线性,精度和准确性.
• 测量人类血清和血样本中RBP4和TTR度和变异性的方法的应用.

主要成果:

• LC-MS/MS方法证明了RBP4 (0.5-6μM) 和TTR (5.8-69μM) 的线性量化,日间变化率<12%,精度在5%以内.
• 对于RBP4和TTR的个体间变异性为18-26%;个体内变异性与试验变异性相当.
• 量化结果与现有的酶相关免疫吸收试验 (ELISA) 有很好的相关性.

结论:

• 开发的LC-MS/MS方法可提供生物样本中RBP4和TTR的可靠的同时绝对量化.
• 该方法适用于临床生物标志物研究,可用于循环RBP4,TTR和视网醇的静态度分析.