双 AAV 载体,以有效地传递大型转基因
David M Mittas1, Lisa M Riedmayr2,3, Zoran Gavrilov4
1Department of Pharmacy-Center for Drug Research, Ludwig-Maximilians-Universität, Munich, Germany.
Nature protocols
|September 11, 2025
概括
双重腺相关病毒 (AAV) 载体使大基因传递成为可能,克服了单个AAV的局限性. 该协议详细介绍了它们的设计,生产和评估,以实现高效的 in vivo 基因疗法应用.
科学领域:
- 基因治疗 基因治疗
- 分子生物学分子生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 腺相关病毒 (AAV) 载体是体内基因传递的标准,但载荷能力有限 (<5 kb).
- 提供大型治疗基因和CRISPR工具需要克服AAV大小限制.
研究的目的:
- 为设计,生产和评估双 AAV 矢量提供一个全面的协议.
- 通过使用双AAV技术,便于高效地在体内输送大型DNA片段.
主要方法:
- 选择双重AAV策略和设计/克隆治疗基因的指南.
- 在体外评估表达效率和双重AAV生产.
- 在人类细胞模型 (iPSC衍生的视网膜器官) 和小鼠体内研究中的评估.
- 在各种组织中分析转基因表达 (RNA和蛋白质).
主要成果:
- 该协议提供了一种结构化的方法来开发双AAV矢量.
- 在人类有机体模型和小鼠系统中成功应用.
- 为优化大型DNA片段的体内传递提供了一个框架.
结论:
- 双AAV载体是克服基因疗法的载荷限制的强大工具.
- 该协议支持用于大型遗传有效载荷的基因传递的进步.
- 该方法在模型生物和人类器官培养物之间具有适应性.
