在Caco-2模型中量化四个关键肠道透性标记物的全面UPLC-MS/MS方法
Luciana Silva de Araújo1, Eduardo José Crevelin2, Luiz Alberto Beraldo de Moraes2
1School of Pharmaceutical Sciences of Ribeirão Preto, University of São Paulo, Av. Prof. Dr. Zeferino Vaz, s/n, Ribeirão Preto 14040-903, SP, Brazil.
Molecules (Basel, Switzerland)
|September 13, 2025
概括
一种新的UPLC-MS/MS方法量化了Caco-2细胞中的肠道药物透性标记物. 这种标准化的方法增强了药物开发和药物分类的监管评估.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 药理动力学 药理动力学
- 在体外药物代谢和药理动力学 (DMPK)
背景情况:
- 该Caco-2细胞单层模型对于预测肠道药物透性至关重要,并被监管机构 (FDA,EMA,WHO) 接受,用于生物制药分类系统 (BCS) 的生物豁免应用.
- 缺乏关键肠道透性标记物的标准化,同时量化方法,这阻碍了药物开发的一致性评估.
- 选择的药物 (阿提诺洛尔,普拉诺洛尔,氨酸,维拉帕米尔) 代表了不同的肠道运输机制:半细胞体,被动跨细胞体和P-葡萄糖蛋白 (P-gp) 流量.
研究的目的:
- 开发和验证一种全面的超高性能液体染色学-并联质谱法 (UPLC-MS/MS) 方法,用于同时量化四种不同的肠道透性标记物.
- 为了将这种验证的方法应用于Caco-2细胞单层测定,以评估药物运输概况和P-gp介导的流量.
- 为促进监管和基于BCS的药物分类研究的体外透性评估的标准化做出贡献.
主要方法:
- 根据FDA指导方针开发和验证UPLC-MS/MS方法,确保选择性,线性 (r2>0.998),精度和准确性.
- 固相提取 (SPE) 的优化,以增强分析物回收和减轻矩阵效应.
- 验证方法应用于Caco-2细胞透性试验,以分析药物运输和P-gp抑制.
主要成果:
- 该UPLC-MS/MS方法表现出强大的性能,满足了同时量化阿提诺洛尔,普拉诺洛尔,胺和维拉帕米尔的所有验证标准.
- SPE有效地改善了样本准备,导致更高的回收率和减少干扰.
- 在Caco-2细胞中进行的测试成功阐明了不同的药物运输特征,并证实了P-gp抑制效应,特别是维拉帕米尔.
结论:
- 开发的UPLC-MS/MS方法提供了一种标准化,高通量分析解决方案,用于使用Caco-2模型评估肠道药物透性.
- 该方法支持准确的药物表征,传输途径的机械解释,以及BCS分类的监管提交.
- 经过验证的试验提高了药物开发的一致性和可靠性,促进了有效的生物豁免应用和药物分类.
