通过酵母表面显示,对纳米体与嵌入式膜蛋白进行选择

科学领域:

• 膜蛋白结构生物学和生物物理学.
• 抗体工程和蛋白质生物化学.

背景情况:

• 单域抗体或纳米体 (Nbs) 是生物学和医学中宝贵的工具.
• 目前开发Nbs的方法对可溶性蛋白质有效,但对膜蛋白质有限.
• 在本地类似的膜环境中存在对膜蛋白的Nb开发的需求.

研究的目的:

• 提出一种用于对膜蛋白选择纳米体的新方案.
• 为了使Nb在使用liponanoparticles的原生类膜环境中发展.
• 为了证明该协议在各种膜蛋白类型中的适用性.

主要方法:

• 将膜蛋白提取成基于烯-酸 (SMA) 的两性聚合物.
• 形成含有纯化膜蛋白的稳定脂纳粒子.
• 使用酵母表面显示,针对膜蛋白的纳米体的选择.

主要成果:

• 该协议成功地产生了高亲和度 (15200 nM K_D) 和针对四种膜蛋白的选择性纳米体.
• 选择的纳米体-蛋白质复合体通过大小排除色谱学证明了稳定性.
• 纳米体通过索尔塔酶介导的结合功能化,用于分子探针.

结论:

• 开发的协议促进了纳米体选择与膜蛋白在本地类似的膜环境中的选择.
• styrene-maleic acid (SMA) 脂纳粒子是有效的稳定膜蛋白,用于纳米体的发展.
• 这种方法扩大了纳米体在细胞生物学和生物医学应用中的实用性.