验证和优化miR-141/200c淘汰赛小鼠的育种策略,以消除使用FLPo删除剂的非目标基因沉默

科学领域:

• 发展生物学 发展生物学
• 分子生物学分子生物学
• 遗传学 是一个遗传学.

背景情况:

• 包括miR-141和miR-200c在内的miR-200家族的microRNAs (miRNAs) 是神经发生,分化和上皮-介质酶过渡的关键调节者.
• 这些miRNA在发育和癌症和中风等疾病中发挥着重要作用.
• 对于miR-141/200c集群的现有条件淘汰小鼠模型,由于提取磁带的不完整性,可能会导致转录器件的缺陷,这带来了挑战.

研究的目的:

• 开发一种精细可靠的策略,用于生成针对miR-141/200cmiRNA集群的条件淘汰老鼠.
• 确保使用FLPo删除小鼠有效和完全删除miR-141/200c集群.
• 建立一个可解释的小鼠模型来研究miR-141/200c在各种生物过程和疾病模型中的作用.

主要方法:

• 采用了两步繁殖策略,包括FLPo重组,以有效地消费LacZ/新带.
• 使用CRE重组来删除floxed miR-141/200c小RNA集群.
• 通过基因定型,qPCR和在嗅球和肺部等器官的 in situ 杂交验证了完整的 miRNA 删除.

主要成果:

• 通过使用FLPo删除剂小鼠成功生成了条件miR-141/200c淘汰赛小鼠,具有高效的lacZ/neo磁带消除.
• 在相关组织中确认了miR-141和miR-200c的完全删除.
• 证明没有FLPo的不完全删除可以导致邻近基因的意外丢失 (ptpn6, phb2, atn1, eno1).

结论:

• 提出的战略提供了一种可靠的方法,用于创建miR-141/200c集群的清洁条件淘汰.
• 这种精细的方法避免了与残余序列和邻近基因丢失相关的文物.
• 已建立的小鼠模型适用于在生理和病理上下文中准确调查miR-141/200c功能.