一个优化的活/死试验与流细胞计相结合,用于量化酵母细胞中压力后生存率
Hanxi Tang1, Jessica Miller2, Bin Z He3
1Department of Biology, University of Iowa; Department of Chemical and Systems Biology, Stanford University.
Journal of visualized experiments : JoVE
|September 15, 2025
概括
本研究介绍了一种使用LIVE/DEAD染料的标准化流细胞计检查方案,用于量化压力后酵母存活率. 这种方法为评估细胞活力的殖民地形成单位 (CFU) 提供了一个更快,更可扩展的替代方案.
科学领域:
- 微生物学 微生物学
- 细胞生物学 细胞生物学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 在研究中,量化酵母存活率至关重要.
- 使用流细胞计的活/死污点提供高通量分析.
- 为了确保数据质量和可重复性,需要进行标准化.
研究的目的:
- 提出一种标准化的LIVE/DEAD染色协议,用于使用流细胞计量来量化酵母在压力后的生存率.
- 为了将这种方法与殖民地形成单位 (CFU) 试验进行比较.
- 为了突出其在区分死细胞和受损细胞中的实用性.
主要方法:
- 使用SYTO 9和化 (PI) 进行标准化LIVE/DEAD染色.
- 对经过处理的 *Candida glabrata* 样本进行流细胞计分析.
- 流细胞计估计的生存率与CFU结果的比较.
主要成果:
- 标准化协议可靠地量化了酵母在压力后的存活率.
- 流细胞计结果与CFU一致,用于模拟剂量和致命剂量.
- 在亚致命剂量下,该方案表明存活率更高,反映了比CFU更早的可行性评估.
结论:
- 提出的协议是一种快速,可扩展和可重复的替代CFU用于酵母生存量化.
- 它通过在细胞死亡的早期阶段评估活力,为CFU提供了补充数据.
- 这种方法有效地区分了死亡和受损的酵母细胞.
