基于双CRISPR的增强单试验在3D打印磁盘上溶解,用于现场部署多重体细菌检测

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 分子诊断学 分子诊断学
• 生物感应是一种生物感应.

背景情况:

• 基于CRISPR的检测结合复合酶聚合酶放大 (RPA) 提供了快速的核酸检测.
• 现有的方法在性能,复合和现场准备的冷化方面面临挑战.

研究的目的:

• 开发一种增强的,可在现场部署的多重体细菌检测试验.
• 为了提高核酸测试的反应速度,灵敏度和光信号.
• 为了使试剂在3D打印的微流体盘上实现稳定的冷化,用于现场应用.

主要方法:

• 开发了一种增强的单,酶辅助RPA (hRPA) 组合,双CRISPR/uAsCas12a (EOD-CRISPR) 试验.
• 在3D打印的微流体光盘内,EOD-CRISPR试剂在玻璃纤维膜上的冷化,使用三和甘氨酸作为保护剂.
• 测试的验证使用合成食品样本,添加了四种食源细菌.

主要成果:

• 在EOD-CRISPR测试显示显著增强反应速度,灵敏度和光信号.
• 3D打印的微流体盘可以同时检测四个目标.
• 现场检测平台实现了灵敏度 (80%-88.9%) 和特异性 (92.3%-100%),与标准PCR方法相美.

结论:

• 现场部署的多重EOD-CRISPR测定适用于现场细菌检测.
• 在3D打印的微流体光盘上的冷化试验为急诊诊断提供了一个有前途的解决方案.
• 这项技术具有超越细菌检测的各种应用的潜力.