基于qPCR的方法来测量非病毒纳米粒子载体在附着细胞模型中的等离子体内化效率
Priscila Tonon Baschirotto1, Samara Valeria López Ramírez1, Randall Loaiza-Montoya1
1CENIBiot (National Center for Biotechnological Innovations), Alexander Von Humboldt St., Franklin Chang Díaz building, La Geroma, Pavas, San José, Costa Rica.
Analytical biochemistry
|September 17, 2025
概括
量化内部化DNA对于评估非病毒纳米粒子转染效率至关重要. 这项研究验证了精确的DNA提取和qPCR试验,以准确量化细胞中的等离子体复制量,即使报告者基因表达率低.
科学领域:
- 生物技术和制药科学 生物技术和制药科学
- 纳米医学和药物输送
背景情况:
- 非病毒纳米粒子对于基因传递至关重要,包括COVID-19疫苗,但它们的传染效率可能受到限制.
- 像GFP这样的记者分子可能不会准确地反映纳米粒子内部化或转染效率,需要更敏感的量化方法.
研究的目的:
- 为了验证DNA提取和定量PCR (qPCR) 试验,以精确测量内部化等离子体DNA拷贝数.
- 在NIH/3T3细胞中开发一种可靠的方法来量化乳酸-co-glycolic 酸修饰聚乙烯胺 (LGA-PEI) 纳米颗粒传递的等离子体DNA.
主要方法:
- 经过验证的DNA提取和qPCR测定,以确定线性,灵敏度和强度.
- 开发了一种包括细胞外等离子体消化在内的协议,以防止聚合物干扰,并确保内部化DNA的特定量化.
主要成果:
- 优化的qPCR和DNA提取试验显示出高可靠性.
- 在NIH/3T3细胞中,每细胞约有9500到150,000个等离子体,与低GFP表达 (4.1%-18.2%) 相对应.
结论:
- 经过验证的方法提供了一种可靠的方法来定量转染的等离子体DNA,特别是对于低效率的纳米粒子传递系统.
- 这种试验通过精确测量内部化等离子体拷贝数来提高纳米粒子介导基因传递功效的评估.
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