通过超过来净化循环RNA
Karen Guillen-Cuevas1, Xiaoming Lu1, Marc R Birtwistle1
1Department of Chemical and Biomolecular Engineering, Clemson University, 127 Earle Hall, 206 S. Palmetto Blvd., Clemson, SC 29634 USA.
Separation and purification technology
|September 19, 2025
概括
超过有效地净化循环RNA (circRNA),克服线性信使RNA (mRNA) 的局限性. 这种方法实现了高纯度和产量,为可扩展的circRNA治疗制造铺平了道路.
科学领域:
- 生物技术是生物技术.
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 使者RNA (mRNA) 疫苗激起了人们对mRNA疗法的兴趣.
- 由于酶降解,线性mRNA是不稳定的,与更稳定的循环RNA (circRNA) 不同.
- 目前的方法很难从在体外转录 (IVT) 过程中产生的线性污染物中净化circRNA.
研究的目的:
- 为了研究超过来净化来自IVT反应的编码蛋白质的circRNA.
- 评估使用聚硫膜用于circRNA分离的可行性.
- 通过超过来确定circRNA净化最佳操作条件.
主要方法:
- 测量了circRNA,线性前体RNA和切割RNA的选系数,使用具有不同分子量切割线 (30-300 kDa) 的膜.
- 分析了基于透流量的分离性能.
- 估计RNA分离的临界流量,并确定了合适的操作参数.
主要成果:
- 通过超过实现了86%的纯度和>50%的circRNA产量.
- 与尺寸排除高性能液体染色学 (SE-HPLC) 相比,表现出更高的性能,其纯度为41%,收益率为45%.
- 确定了用于circRNA净化的最佳超过条件.
结论:
- 超过是一种高效和优越的方法,可以在研究规模上净化circRNA.
- 超过在生物处理中的可扩展性支持其大规模circRNA治疗制造的潜力.
- 这项研究为通过改进的净化技术推进基于circRNA的治疗方法提供了基础.
