用LC-MS/MS进行代谢查的细胞培养样本样本制备的特点
Nikita V Basov1, Ekaterina A Butikova2, Maria A Sotnikova3
1N.N. Vorozhtsov Novosibirsk Institute of Organic Chemistry, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Novosibirsk, Russia; Novosibirsk State University. Institute of Medicine and Medical Technologies, Novosibirsk, Russia; Novosibirsk State University. Department of Natural Sciences, Novosibirsk, Russia.
Journal of pharmaceutical and biomedical analysis
|September 19, 2025
概括
本研究介绍了一种标准化的样本准备协议,用于使用高性能液体染色体-并联质谱法 (HPLC-MS/MS) 进行代谢查. 优化的方法确保从10,000个细胞中可复制检测代谢物,其中400,000-500,000个细胞产生最佳结果.
科学领域:
- 代谢学 代谢学 代谢学
- 细胞的新陈代谢
- 分析化学 分析化学
背景情况:
- 代谢分析为细胞代谢提供了关键的见解.
- 标准化样本准备对于可重复的代谢查至关重要,特别是可变细胞数量.
- 目前的方法在实现可靠的数据与高性能液体染色学-并联质谱学 (HPLC-MS/MS) 兼容的挑战.
研究的目的:
- 开发和优化一个方便和可重复的样品制备协议,用于通过HPLC-MS/MS进行细胞培养的代谢查.
- 评估细胞计数对代谢覆盖和检测灵敏度的影响.
- 为了建立最佳的细胞数量可靠的半定量代谢分析.
主要方法:
- 使用黑色素瘤细胞系 (SK-MEL-28和B16) 作为模型.
- 优化了样品准备的关键步骤:细胞溶解,代谢物提取和正常化.
- 采用水友互动液态色谱 (HILIC) 和逆相色谱 (RP) 进行分析.
- 评估了不同细胞数量对代谢数据的影响.
主要成果:
- 开发了一个有效的协议,用于样本只有1万个细胞.
- 确定了400,000500,000细胞的最佳细胞计数范围,以实现一致和可重现的检测.
- 证明更大的细胞大小可以改善代谢覆盖率.
- 观察到不同代谢物的不同检测极限,需要定制的制备策略.
结论:
- 拟议的协议提供了一种可靠和可重复的方法,用于通过HPLC-MS/MS对附着黑色素瘤细胞进行代谢查.
- 该协议可以适应非粘附细胞和其他细胞类型.
- 这种标准化的方法通过平衡灵敏度,可重复性和可行性来支持药物代谢学,癌症研究和相关领域的应用.
