来自混合瘤细胞的单克隆抗体全长测序的经济高效方法
Sarah Döring1, Georg Tscheuschner1, Sabine Flemig1
1Federal Institute for Materials Research and Testing (BAM), Richard-Willstätter-Strasse 11, 12489 Berlin, Germany.
Antibodies (Basel, Switzerland)
|September 22, 2025
概括
这项研究提出了一种简化方法,用于从混合瘤细胞中确定全长单克隆抗体序列. 该方法通过提供完整的DNA序列,促进了具有成本效益的重组表达.
科学领域:
- 免疫技术是一种免疫技术.
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 单克隆抗体对于治疗和分析用途至关重要.
- 再组合表达需要对抗体可变区域的编码序列.
- 克隆完整的抗体序列可以保存自然序列,并减轻混合瘤细胞的损失.
研究的目的:
- 开发一种简单的两步工作流程,用于从混合体mRNA克隆全长单克隆抗体.
- 为了使抗体DNA序列用于重组表达的成本有效的确定.
主要方法:
- 来自混合体mRNA的IgG抗体可变区域的放大.
- 桑格测序和IgBLAST分析以确定V-(D-) J基因段.
- 确定小鼠IgG子类,并使用特定的原料放大常数区域.
主要成果:
- 该方法与混合体克隆BAM-CCMV-29-81的RNAIllumina测序相比,产生了完全相同的全长抗体序列.
- MALDI-TOF MS指纹检测证实了6个基因编码的CDR域中5个的有效相关性.
结论:
- 一种精简,具有成本效益的方法,用于从混合瘤细胞系中确定全长单克隆抗体序列.
- 该方法提供了准备用于重组抗体表达的DNA序列.
