一个快速的CRISPR-Cas12a/T7EI集成工作流程,用于高通量查同卵性突变细胞系
Guohui Xiao1, Hongyu Shi2, Qiao Lin3
1National Clinical Research Center for Infectious Diseases, Guangdong Provincial Clinical Research Center for Tuberculosis, Shenzhen Third People's Hospital, Shenzhen University, Shenzhen 518112, China.
Journal of pharmaceutical and biomedical analysis
|September 24, 2025
概括
HomoSelect-CT使用CRISPR-Cas12a和T7内核酶I (T7EI) 基因定型简化了同卵性突变细胞系查. 这种可访问的方法可以在不到4小时内快速识别基因组编辑的细胞系.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 是一个遗传学.
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 对于基因研究来说,对同卵性突变细胞系的有效查至关重要.
- 低效率的CRISPR-Cas9编辑在隔离所需的同卵性突变物方面提出了重大挑战.
研究的目的:
- 开发一个集成和高效的工作流程,以简化对同卵性突变细胞系的查.
- 提供一种无需专门仪器的可访问方法.
主要方法:
- 开发了HomoSelect-CT,这是一个集成的工作流程,将CRISPR-Cas12a核酸检测与T7内核酶I (T7EI) 基因定型相结合.
- 在CRISPR-Cas9编辑的THP-1细胞上验证了该方法.
- 使用桑格测序和西斑 (WB) 的结果得到证实.
主要成果:
- 在CRISPR-Cas9编辑的THP-1细胞中成功识别了同卵性突变.
- 证明HomoSelect-CT是一种强大的,高效的替代方案,可以快速隔离基因组编辑细胞系.
- 在不到4小时内完成了整个选工作流程.
结论:
- 在CRISPR查方法中,HomoSelect-CT提供了显著的进步.
- 工作流程简单,易于使用,适合高通量选.
- 这种方法对于由低效率编辑事件引起的突变特别有效.
