一种新的高效免疫协议,用于检测染色体/核蛋白以及重复性DNA,在长期储存的甲素固定根尖的 squash 制剂中

科学领域:

• 细胞遗传学 细胞遗传学
• 分子生物学分子生物学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 传统的对大体染色体的蛋白质检测面临着诸如凝聚和非特异性光等挑战,阻碍了准确的免疫标记和光在位杂交 (FISH).
• 现有的方法需要快速处理样本,使研究时间表复杂化,并限制固定组织和幻灯片制剂的储存选项.

研究的目的:

• 开发一种高效的,以南瓜为基础的协议,用于植物中固定甲的大型染色体和核 (例如,Allium,Scilla,Tradescantia).
• 为了实现高质量的免疫标记,最小的非特异性光,使敏感的免疫-FISH karyotyping.
• 为了长期储存固定根尖和幻灯片制剂.

主要方法:

• 使用10%的缓冲甲固定,然后在70%的乙醇中长期储存.
• 在酸缓冲剂中采用了pectinase-cellulase消化和在45%的酸中适度压碎.
• 集成的幻灯片结,乙醇辅助细胞粘附,糖储存和微波抗原检索 (MWAR).

主要成果:

• 实现了最佳的染色体/核扩散和良好的细胞粘附于幻灯片.
• 证明有效的抗原检索,减少或消除非特异性光和增强抗体透.
• 通过rDNA探针成功执行了敏感的免疫FISH,允许同时可视化FISH信号和蛋白质焦点.

结论:

• 这种新的协议为阿尔代固定植物染色体的现有方法提供了显著的改进.
• 它可以长时间存储样品,快速固溶液制备,并提供优质的染色体/核扩散.
• 该方法提高了实验室工作的灵活性,并扩大了植物细胞表观遗传研究的可能性,包括同时进行DNA-蛋白质可视化.