在一个完全质子化的蛋白质中测量长距离接触,在105kHz的魔法角度旋转时旋转

科学领域:

• 生物分子固态核磁共振 (NMR) 光谱学.
• 蛋白质结构的确定和表征.
• 先进的NMR脉冲序列开发.

背景情况:

• 通过快速魔法角旋转 (MAS) 进行质子 (1H) 检测已经取得了先进的生物分子NMR.
• 传统上,对于高分辨率的蛋白质结构分析,化是必要的.
• 现代MAS频率 (>100 kHz) 减少了对代的需要,使得完全质子化的系统的研究成为可能.

研究的目的:

• 评估3D脉冲序列 ((H) NCOH和 (H) NCAH) 在完全质子化蛋白质中测量远程C-H相关性的实用性.
• 评估高MAS率对光谱质量和距离测量的影响.
• 为了确定NMR研究的可行性,而不是去和反向交换.

主要方法:

• 使用了两个3D脉冲序列: (H) NCOH和 (H) NCAH.
• 在一个完全质子化的蛋白质样本上进行实验.
• 采用了105kHz的魔法角旋转 (MAS) 速率.
• 分析了由此产生的NMR光谱,找出长距离的C-H相关性.

主要成果:

• (H) NCOH光谱揭示了每个残留物多次序列和结构相关的远程碳-质子 (CO-H) 接触,高达6 Å.
• (H) NCAH光谱显示了较少的相关性,主要是内部剩余的形质子接触.
• 质子化系统在Cα-H实验中表现出双极切断,而CO-H相关性仍然与化样本相比较.

结论:

• (H) NCOH序列是有效的测量长距离的CO-H距离在完全质子化的蛋白质在高MAS率.
• 这种方法使得使用远程交叉偏振在更容易获得和更实惠的样本中进行距离测量.
• 扩大了质子检测NMR的范围,用于无法实现代的系统.