在混合模式SAX静止相上对Patisiran的非变质和变质分析之间进行温度控制的过渡,使用二维液态染色学二维液态染色学
Mirna Maalouf1, Niklas Carstensen1, Marc Wolter1
1Institute of Pharmaceutical Sciences, Pharmaceutical (Bio-)Analysis, University of Tübingen, Auf der Morgenstelle 8, 72076 Tübingen, Germany.
静止相类型显著影响siRNA双重稳定性和化温度. 一个特定的基于二氧化的柱子在60°C时诱导化,使单链分析成为可能,与基于聚合物的柱子不同.
科学领域:
- 分析化学 分析化学
- 生物化学 生物化学
- 制药科学 制药科学
背景情况:
- 寡核酸,包括小干扰RNA (siRNA),是关键的核酸疗法,需要强大的分析方法来控制质量.
- 准确评估siRNA完整性,特别是在非变性条件下的非分离双重形式,对于治疗疗效至关重要.
- 现有的染色学方法如SEC,AEX和IP-RP-LC在充分表征siRNA双重稳定性方面存在局限性.
研究的目的:
- 研究不同静止相对siRNA复合体化温度和解离的影响.
- 开发和优化染色学方法,同时分析完整的siRNA复合体及其构成单个链.
- 评估各种液态染色学 (LC) 条件对siRNA质量评估的适用性.
主要方法:
- 使用基于二氧化的多孔混合模式trifenylphosphonium-SAX和基于四度三甲基-SAX的非多孔的水性聚合物颗粒的四度三甲基-SAX列进行siRNA分析.
- 在不同温度和化条件下采用尺寸排除色谱 (SEC),离子交换色谱 (AEX) 和离子对逆相液色谱 (IP-RP-LC).
- 开发了一种令人震惊的二维液态色谱 (2D-LC) 方法,用于集成的非变质和变质分析.
主要成果:
- 三-SAX静止阶段在60°C左右诱导了Patisiran siRNA双重体的柱上化,允许在10°C时单链分离,并在80°C时进行双重分析.
- 四级三甲基-SAX柱在相同的条件下没有诱导siRNA双重溶解到80°C,这表明有不同的保留机制.
- IP-RP-LC显示siRNA双重稳定性低于20°C,在更高的温度发生变质.
- 2D-LC方法成功实现了在一次运行中同时进行非变质 (双重) 和变质 (单链) 分析.
结论:
- 静止相化学在染色学分析过程中极大地影响siRNA双重稳定性和化行为.
- 三酸-SAX柱通过控制温度为完整的siRNA双重和单链分析提供了一个多功能平台.
- 一个2D-LC策略为全面的siRNA质量控制提供了一个有效的解决方案,评估结构完整性和链组成.
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