通过代用矩阵方法在大鼠血中验证和样本生物分析原氨酸IX

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 分析化学 分析化学
• 药理学 药理学是指药理学的学科.

背景情况:

• 原氨酸IX (PPIX) 在血红素生物合成中至关重要,作为生物标志物和光敏感剂.
• 由于矩阵效应和基线变异性,难以在生物样本中准确量化内源性PPIX.
• 现有的方法缺乏无分析物的控制矩阵,以进行可靠的校准.

研究的目的:

• 开发和验证一种高性能液体染色学光检测 (HPLC-FLD) 方法,用于量化大鼠血中的Protoporphyrin IX (PPIX).
• 实施一个符合ICH M10准则的替代矩阵策略,用于准确的PPIX测量.
• 建立一个强大可靠的生物分析方法,用于在临床前研究中监测PPIX.

主要方法:

• 开发了一种HPLC-FLD方法,用于在老鼠血中定量PPIX.
• 利用可见光诱导的分析剂剥离,从老鼠血中创建一个无分析剂的替代基质.
• 根据ICH M10指南验证了该方法,评估了选择性,线性,精度,准确性和稳定性.
• 应用该方法来分析用氨基氨酸治疗的老鼠的血样本.

主要成果:

• 开发的HPLC-FLD方法在10-700 ng/mL范围内显示出出色的选择性和线性 (r ≥0.995).
• 确定量化的下限 (LLOQ) 为10 ng/mL,精度和准确性令人满意.
• 在各种储存和处理条件下证实了分析剂和内部标准的稳定性.
• 该方法成功量化了在鼠类血中的PPIX,在体内给定了氨基氨酸后.

结论:

• 使用替代矩阵策略的验证HPLC-FLD方法可以准确可靠地量化大鼠血内源PPIX.
• 这种方法克服了PPIX测量的先前挑战,并与国际监管标准 (ICH M10) 保持一致.
• 该方法为血中PPIX监测提供了一种实用,具有成本效益的解决方案,可能为未来的生物分析方法开发创造先例.