对于低细胞输入的高通量蛋白质组积分可溶性变化试验,使用一端式
Maico Lechner1, Pierre Sabatier2,3, Jesper V Olsen4
1Department of Cellular and Molecular Medicine, Novo Nordisk Foundation Center for Protein Research, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, Copenhagen, Denmark.
Communications chemistry
|September 27, 2025
概括
我们通过使用蛋白质组积溶性改变 (PISA) 简化了药物标参与分析. 这种方法显著减少了细胞需求和处理时间,提高了更广泛实验室应用的效率.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 蛋白质组学是指蛋白质组学.
- 化学生物学 化学生物学
背景情况:
- 细胞热转移试验 (CETSA) 和其基于质谱的变体,如蛋白质组积溶性改变 (PISA),对于监测药物向参与至关重要.
- 目前的PISA方法在吞吐量,可扩展性和样本量方面存在局限性,这限制了它们的广泛使用.
研究的目的:
- 通过整合单一提示方法,为PISA开发一个简化和可扩展的样本准备工作流程.
- 减少样本输入要求,提高基于CETSA的药物向药物参与概况的效率和可访问性.
主要方法:
- 结合PISA与一点方法用于简化样本准备.
- 使用的n-Dodecyl-β-D-Maltoside (DDM) 用于细胞溶解,与质谱学和一键处理兼容.
- 将细胞输入要求降低到每μL的200个细胞.
- 应用一键PISA工作流程,以96井板格式进行化酶抑制剂的分析.
主要成果:
- 在PISA中实现了显著较低的细胞要求 (低至200细胞/μL).
- 通过一点PISA方法证明了可比的蛋白质深度和改进的可重复性.
- 减少材料和溶剂的使用,与传统协议相比,蛋白质分解消化速度更快.
- 在12小时内实现了从细胞处理到质谱注射的完整工作流.
结论:
- 单一提示PISA方法为药物向参与研究提供了一种具有成本效益,快速和用户友好的方法.
- 这种集成的工作流提高了可扩展性和可访问性,使先进的蛋白质基因分析成为更多实验室可行的.
- 优化的工作流通过提高目标参与评估的效率来加速药物发现和开发.
