开发TaqMan实时光定量PCR方法,用于识别和定量Sinomenium acutum-原始草药药物

科学领域:

• 药物鉴定和植物化学学
• 分子生物学和遗传学
• 分析化学 分析化学

背景情况:

• 清风 (QFT,Sinomenium acutum) 和其杂物之间的形态相似性导致频繁的市场替代.
• 确保QFT等传统草药的真实性和质量对于患者的安全性和治疗疗效至关重要.

研究的目的:

• 开发和验证一种基于TaqMan探针的特定,敏感和定量实时PCR试验,用于检测QFT.
• 为了区分QFT与常见的伪造剂,包括形态和遗传上相似的贝多根 (BDG,Menispermum dauricum).
• 评估测试在各种加工的草本基质中检测QFT的可靠性及其对DNA降解的耐受性.

主要方法:

• 开发实时定量PCR (qPCR) 试验,针对QFT的内部转录间隔器2 (ITS2) 区域的57bp片段.
• 使用多种样本进行验证:QFT,BDG,其他 adulterants (QST,JST,KJT,HBQFT),商用QFT片,以及实验室制备的.
• 建立基于外部标准的量化方法来确定QFT改水平,特别是BDG.

主要成果:

• 在qPCR试验中,基于不同的周期值 (Ct) 和放大曲线,QFT和所有测试的伪造物之间有明确的区别.
• 外部验证显示,含有1100%BDG的尖草本粉末中的QFT的恢复率高 (81.79102.38%).
• 该试验可靠地检测了加工过的片剂和冷干燥中的QFT,表明对DNA降解的耐受性很高.

结论:

• 开发的TaqMan基于探针的qPCR试验提供了QFT的具体和定量检测.
• 该方法有效地识别QFT在干燥的原材料,片和加工产品,如药片和中.
• 这种测试支持整个草药生产链的强有力的质量控制,通过可靠地验证QFT.