在Scedosporium apiospermum中优化基因组编辑CRISPR-Cas9技术

科学领域:

• 菌类学 菌类学是指菌类学.
• 分子生物学分子生物学
• 基因工程是一种基因工程.

背景情况:

• 斯基多斯波里亚物种是机会性真菌病原体,引起各种人类感染.
• 有限的遗传工具阻碍了对Scedosporium病原机制的理解.
• 在Scedosporium的功能性基因组研究由于高的非同源端连接率而复杂化.

研究的目的:

• 优化CRISPR-Cas9技术用于Scedosporium物种中的基因编辑.
• 在野生型和突变型Scedosporium菌株中开发有效的基因破坏方法.
• 为了促进未来的功能基因组和补充研究在Scedosporium.

主要方法:

• 使用在体外组装的Cas9核糖蛋白 (RNP) 复合体用于CRISPR-Cas9基因编辑.
• 开发了一种双RNA引导的Cas9系统,用于通过KU70删除突变体的同源重组来进行向基因分裂和破坏.
• 采用了两个Cas9 RNP复合体,在未经KU70破坏的情况下,在野生型菌株中有效删除基因.

主要成果:

• 在 ΔKU70 Scedosporium 突变体中成功破坏了四个二氧化酶基因,使用双重 Cas9 RNP 方法与抗胺素耐药性磁带.
• 通过仅使用两个Cas9 RNP复合物,在野生类型菌株中实现了二氧化酶基因的有效删除,效率高达20%.
• 证明优化的CRISPR-Cas9方法克服了与非同类重组和有限选择标记物相关的局限性.

结论:

• 优化的CRISPR-Cas9 RNP技术为Scedosporium物种的基因操纵提供了强大而有效的工具.
• 开发的方法使得有针对性的基因破坏成为可能,为先进的功能性基因组分析铺平了道路.
• 这些进展对于了解Scedosporium的致病性和开发有针对性的干预措施至关重要.