在Pichia pastoris中基于ID-MS的代谢物的定量分析:一步一步的协议
Marc Carnicer1,2, S Aljoscha Wahl3,4, Reza Maleki Seifar2,5
1Department of Chemical Engineering, Autonomous University of Barcelona, Barcelona, Catalonia, Spain.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|October 1, 2025
概括
这项研究提出了一个四步定量代谢学协议,用于精确测量Komagataella phaffii.的细胞内代谢物. 该方法准确量化了中央碳代谢中的关键代谢物,有助于理解细胞反应.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 系统生物学 系统生物学
- 代谢学 代谢学 代谢学
背景情况:
- 定量代谢学使代谢表型的表征成为可能.
- 了解细胞对干扰的反应需要准确的细胞内代谢物量化.
研究的目的:
- 描述一个强大的四步协议,用于Komagataella phaffii. 的定量代谢.
- 为了能够精确测量细胞内代谢物度,用于代谢网络分析.
主要方法:
- 一个包含冷过,用冷甲醇代谢火,用沸的乙醇提取代谢物,并通过同位素稀释质谱法 (LC-IDMS/MS和/或GC-IDMS) 量化量化的四步方案.
- 对甲基转化酵母 Komagataella phaffii. 的协议的调整.
主要成果:
- 该协议允许量化中央碳代谢中的大多数代谢物,包括糖溶性,三碳酸循环和酸途径中间体.
- 协因子和自由氨基酸也可以量化.
- 该方法已在葡萄糖和混合碳基板 (甲醇/葡萄糖或甲醇/甘油) 上种植的K. phaffii中得到验证.
结论:
- 这种定量代谢学协议为K. phaffii. 提供了准确的细胞内代谢物度.
- 该方法对表征代谢表型和细胞对各种生长条件的反应有价值.
