通过使用CRISPR/Cas9来生成Pichia pastoris高吞吐量敲除菌株的高吞吐量生成
Kirill Smirnov1, Lukas Rieder2, Anton Glieder3
1Christian Doppler Laboratory for Innovative Pichia pastoris Host and Vector Systems, Graz University of Technology, Petersgasse, Graz, Austria. k.smirnov@tugraz.at.
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
|October 1, 2025
概括
这项研究提出了一个快速的CRISPR/Cas9管道,用于生成Komagataella phaffii突变菌株. 该方法可以实现高通量基因组工程,具有易于复制的步骤和可用于进一步研究的等离子体消除.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 微生物遗传学 微生物遗传学
- 生物技术是生物技术.
背景情况:
- 克里斯普尔/卡斯9系统是基因组工程的革命性工具,在各种生物体中扩展了其应用.
- 上一篇 针对Komagataella phaffii的CRISPR/Cas9工具允许在不到两周的时间内产生突变菌株.
- 现有的K. phaffii的CRISPR系统利用了情节载体,使得可用于清洁突变菌株的等离子体和标记物回收.
研究的目的:
- 用CRISPR/Cas9.9来描述一个高吞吐量管道,用于生成使用CRISPR/Cas9.9的Komagataella phaffii突变菌株.
- 详细说明通过NHEJ修复创建基因中断的K. phaffii突变的四步过程.
- 通过一个兼容96井格式的程序,促进可复制和简化研究.
主要方法:
- 在CRISPR/Cas9等离子体组合.
- 科马加塔拉法菲的转变.
- 对突变菌株的查和等离子体的消除.
主要成果:
- 建立了一个可复制的四步管道,用于高吞吐量生成K. phaffii突变菌株.
- 该方法允许产生突变菌株,并打断开放的读取框架.
- 该系统利用体载体来表达CRISPR/Cas9,促进等离子体的消除,从而产生干净的突变菌株.
结论:
- 开发的CRISPR/Cas9管道为Komagataella phaffii基因组工程提供了一种高效和高通量方法.
- 该协议的可复制性和适应性以96井格式简化和加速研究.
- 获得空变异菌株的能力使该系统成为后续遗传研究的理想选择.


