从KOLF2.1J参考线快速区分人类iPSC衍生的微质的一个无异物协议
Nélio A J Oliveira1, Katherine R Lewkowicz1, Patricia A Clow1
1The Jackson Laboratory for Genomic Medicine, 10 Discovery Drive, Farmington, CT 06032, USA.
我们开发了一种快速,无外来物质的方法,用干细胞制造人体微质细胞. 该协议在两周内产生功能性微质,用于疾病研究和药物查.
科学领域:
- 神经科学是一个神经科学.
- 干细胞生物学 干细胞生物学
- 免疫学 免疫学 免疫学
背景情况:
- 人类的微质细胞对大脑健康和疾病至关重要.
- 目前用于产生诱导多能干细胞 (iPSC) 衍生微质细胞的现有方法往往是低效的或需要动物产品.
- 对于强大的研究,需要一个可扩展的,无异种的协议.
研究的目的:
- 建立一个快速的,无外基因的协议,以使人类诱导多能干细胞 (hiPSCs) 分化为功能性微质细胞.
- 为了优化差异化使用KOLF2.1J hiPSC线中的多克西环素诱导性六转录因子 (6-TF) 系统.
- 对于成熟的微质标记物和功能来描述由此产生的i-Microglia.
主要方法:
- 在KOLF2.1J hiPSC中利用了六种转录因子 (6-TF) 的多西环林诱导表达.
- 在Lamininin-521上培养细胞,以确保无外基因条件.
- 评估了微质标记物 (P2RY12,SSEA4),细胞活性和对LPS刺激的免疫反应.
主要成果:
- 在两周内实现了均的微质分化.
- 生成的i-Microglia表达成熟标记物 (P2RY12) 和缺乏多能性标记物 (SSEA4).
- 经过LPS后刺激的功能性细胞和免疫标志物上调调节 (CD80,CD83).
结论:
- 该协议提供了一个可复制和可扩展的平台,用于从hiPSCs生成功能性人类微质细胞.
- 无外基因系统适用于疾病建模,神经炎症研究和治疗查.
- 一条带有mCherry报告器的修改后的线路可以在体外和体内促进微质细胞的跟踪.
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