超过膜的比较评估,用于从A549细胞调节介质中对外体隔离

科学领域:

• 细胞外囊泡研究研究
• 生物技术是生物技术.
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 外体隔离方法各不相同,需要直接比较常见的技术.
• 离心式分子重量切断 (MWCO) 过器被广泛使用,但需要标准化的评估.

研究的目的:

• 为了量化比较10,50和100kDa的Amicon MWCO过器用于外体隔离.
• 评估MWCO选择对外体的产量,大小,同质性和纯度的影响.

主要方法:

• 从A549条件介质中分离出外体,使用10,50和100kDa的Amicon过器.
• 多模性表征包括Z-平均尺寸,多分散性指数 (PDI),FluoroCet量化,以及对正规标记物的西方抹杀 (CD63,TSG101).

主要成果:

• 与10和50kDa过器相比,100kDa过器产生了显著更大的 (90.83nm) 和更同质的外体 (PDI = 0.455).
• 100kDa过器 (∼1.3 × 10^9个外体/μg蛋白质) 的外体产量最高,显著超过了10和50kDa过器.
• 西方涂抹证实了100kDa分离物中CD63和TSG101标记物的优越丰富.

结论:

• MWCO的选择极大地影响了外体细胞的产量,纯度和质量.
• 100kDa超是一种实用且具有成本效益的方法,用于从细胞培养基中分离外体.