一个有效的策略可溶性牛肠激酶表达在大肠杆菌埃舍里奇亚
Akanksha1, Manjul Tripathi2, Krishna Jyoti Mukherjee3
1University School of Biotechnology, Guru Gobind Singh Indraprastha University, Dwarka, New Delhi, 110078, India.
Biotechnology letters
|October 3, 2025
概括
我们开发了一种精简的方法,通过优化伴随者共表达和诱导时间,在大肠杆菌中产生可溶性牛肠激酶轻链 (bEkL). 这种方法显著提高了bEkL产量和用于重组蛋白净化的特定活性.
科学领域:
- 生物化学 生化学
- 分子生物学分子生物学
- 蛋白质表达方式
背景情况:
- 牛肠激酶轻链 (bEkL) 是一种至关重要的血清蛋白质酶,用于从重组蛋白质中分离亲和度标签.
- 在大肠杆菌中实现bEkL的可溶性表达是具有挑战性的,因为它具有多个氨酸残留物和二硫化键.
- 以前涉及基因突变或可溶性标签的策略取得了有限的成功.
研究的目的:
- 开发一种更简单,更有效的方法,用于在大肠杆菌中产生可溶性bEkL.
- 优化GroES-GroEL陪伴物和bEkL的共同表达,以提高产量和活动.
- 确定最大限度地提高可溶 bEkL 生产的最佳条件.
主要方法:
- 在大肠杆菌的SHuffle细胞中,GroES-GroEL陪伴系统的共同表达.
- 优化诱导时间:在bEkL基因诱导前2小时诱导GroES-GroEL等离子体.
- 在TB介质中以18°C的温度控制表达,并添加营养脉冲以防止饥饿.
主要成果:
- 在优化的条件下,可溶性bEkL的10毫克L−1产生了高特异活性 (~5,000AU μg−1).
- 通过Ni-NTA亲和色谱进行净化,结果为>90%的同质bEkL蛋白.
- 与初始表达水平相比,纯化的bEkL显示酶活性增加了大约20倍.
结论:
- 开发的方法为E. coli中可溶性bEkL的产生提供了显著的改进.
- 优化的陪伴者共同表达和受控的诱导是克服表达挑战的关键.
- 纯化bEkL的高产量和活性促进了高效的重组蛋白质加工.
