使用体显示和冷-EM,对LptDE结合式自行车的高通量识别和表征

科学领域:

• 微生物学和分子生物学
• 药物发现和开发 药物发现和开发
• 结构生物学 结构生物学

背景情况:

• 脂聚糖 (LPS) 运输 (Lpt) 系统对于维护格拉姆阴性细菌中不对称的外膜 (OM) 完整性至关重要.
• 由于其外部可访问性,LptDE对于LPS传递到OM的外部传单至关重要,并且代表了一个潜在的药物目标.

研究的目的:

• 为了识别和描述针对*Shigella flexneri* (SfLptDE) 中LptDE复合体的新型抑制剂.
• 建立一个精简的工作流程,以发现针对LptDE.LptDE等膜结合蛋白标的抑制剂.

主要方法:

• 利用自行车菌体显示平台对针对SfLptDE的酸结合剂进行选.
• 采用冷电子显微镜 (cryo-EM) 进行-SfLptDE复合物的结构确定.
• 应用表面等离子体共振 (SPR) 用于对结合相互作用的定量分析.

主要成果:

• 在SfLptDβ-barrel上确定了四种不同的表位,它们与双循环结合.
• 标志着已识别的双循环抑制剂的独特结合基因.
• 证明了菌体显示,冷EM和SPR的成功组合,用于基于目标的药物发现.

结论:

• 单环可以有效地与SfLptDE复合体结合,向重要的LPS运输.
• 开发的方法提供了一种有效的方法,用于识别和优先考虑针对具有挑战性的膜蛋白标的抑制剂.
• 这项工作奠定了开发新的治疗策略的基础,通过准LptDE系统来对抗阴性细菌感染.