RIPK4-p53相互作用通过Ser15酸化驱动阿弗拉托克素B1诱导的线粒体亡:一个CRISPR-Cas9机理学研究

科学领域:

• 毒理学 毒理学 毒理学
• 分子生物学分子生物学
• 细胞生物学 细胞生物学
• 腎臟病學 (nephrology) 是一種醫學.

背景情况:

• 非洲毒素B1 (AFB1) 是一种普遍存在的,有毒的,致癌的真菌毒素,污染了全球食品供应.
• AFB1对公众健康,特别是脏健康构成重大风险,但涉及的宿主因素尚不清楚.
• 识别宿主因子对于理解和减轻AFB1诱导的毒性至关重要.

研究的目的:

• 通过全基因组CRISPR/Cas9查,识别介导阿弗拉托克素B1诱导细胞细胞毒性的关键宿主因素.
• 阐明这些宿主因素对AFB1毒性有所贡献的分子机制.

主要方法:

• 使用了猪上皮细胞 (PK15) 细胞模型.
• 采用全基因组的CRISPR/Cas9查来识别关键宿主因素.
• 进行了淘汰验证,细胞活力测试 (CCK-8),基因表达分析 (qRT-PCR),蛋白质分析 (西方涂抹,共同免疫沉),亡测试 (AO-EB染色,流细胞计).

主要成果:

• 受体相互作用蛋白激酶4 (RIPK4) 被确定为AFB1毒性中关键的亲亡因子.
• 在对AFB1.1的反应中,RIPK4淘汰显著增加了细胞活力 (~50%) 和减少了细胞亡 (~44%).
• RIPK4直接与p53相互作用,增强其酸化并促进p53介导的线粒体亡途径 (对APAF1,Cyt-c的降调,Caspase-9/3的分裂,p53 Ser15的酸化;Bcl-2的上调).

结论:

• RIPK4通过激活p53-介导的线粒体亡途径,在促进阿弗拉托辛B1诱导的毒性方面发挥着关键作用.
• RIPK4代表了一种用于减轻AFB1诱导的损伤的新型治疗标.
• 进一步的体内研究和对RIPK4特异性抑制剂的调查是有必要的.