使用全球蛋白质稳定性试验监测转录因子EB稳定性的协议
Boju Wang1, Yueling Zhao1, Ruiyan Li1
1Key Laboratory of Breast Cancer Prevention and Therapy (Ministry of Education), The Province and Ministry Co-sponsored Collaborative Innovation Center for Medical Epigenetics, Key Laboratory of Immune Microenvironment and Disease (Ministry of Education), State Key Laboratory of Experimental Hematology, School of Basic Medical Sciences, Tianjin Medical University, Tianjin 300070, China.
STAR protocols
|October 12, 2025
概括
这项研究引入了一种新的协议,用于测量转录因子EB (TFEB) 的稳定性,这是细胞废物清除中的关键蛋白质. 该方法使用双光报告器和在降低YEATS2水平后的流细胞计.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子生物学分子生物学
- 生物化学 生物化学
背景情况:
- 转录因子EB (TFEB) 对于细胞蛋白质稳定至关重要,调节自和溶酶体通路.
- 通过各种监管机制,TFEB的活动受到严格控制.
- 了解TFEB调节对于理解细胞健康和疾病至关重要.
研究的目的:
- 提出一种用于量化TFEB稳定性的新方案.
- 为了评估TFEB在调节器功能丧失后的稳定性,YEATS域含蛋白2 (YEATS2) 进行了评估.
- 使用流细胞计建立一种灵敏而高效的方法.
主要方法:
- 为TFEB稳定性开发一个双光报告系统.
- 使用 YEATS2 敲下来诱导功能丧失.
- 采用流细胞计测量用于敏感的光检测和分析.
- 对矢量构造,细胞转化和分析工作流程的详细程序.
主要成果:
- 该协议允许精确量化TFEB稳定性.
- 在 YEATS2 淘汰后,已证明成功应用.
- 该方法提高了灵敏度,并减少了与现有技术相比处理时间.
结论:
- 该协议为研究TFEB法规提供了一个强大的方法.
- 它促进了对YEATS2在TFEB稳定中的作用的研究.
- 优化的工作流有助于推进对自-溶酶体网络和蛋白质稳定性的理解.
