在大肠杆菌中表达,净化和重新折叠一个优化的SARS-CoV-2受体结合域
Anamika Biswas1, Arighna Sarkar1, Sreejith Raran-Kurussi1
1Tata Institute of Fundamental Research Hyderabad, 36/P Gopanpally, Serilingampally, Hyderabad, Telangana 500046, India.
Plasmid
|October 12, 2025
概括
研究人员设计了一种SARS-CoV-2尖端蛋白RBD序列,以实现高效的重新折叠和高产量. 这种活性蛋白显示出强大的结合亲和力,为开发新的COVID-19抗病毒药物提供了有希望的目标.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 病毒学 病毒学
- 结构生物学 结构生物学
背景情况:
- 由SARS-CoV-2引起的COVID-19需要有效的治疗方法.
- SARS-CoV-2尖端蛋白的RBD与人类的ACE2受体结合,使其成为干预的关键目标.
- 功能性RBD的高效生产对于开发向疗法至关重要.
研究的目的:
- 设计SARS-CoV-2 RBD序列,以改善体外再折叠和高产量生产.
- 确认重新折叠的RBD的生物活性和结合亲和力.
- 评估工程RBD作为治疗目标的潜力.
主要方法:
- 根据结构洞察力改进ORF边界的工程RBD序列.
- 开发了针对蛋白质表达的定制重新折叠程序.
- 利用表面等离子体共振 (SPR) 证实生物活性和与LCB1小蛋白连接体的结合亲和性.
主要成果:
- 获得高产量 (10-12 mg/L) 的活性,重新折叠的RBD蛋白.
- 通过SPR.确认了RBD与LCB1连接体 (KD<10nM) 的显著结合亲缘关系.
- 证明了精确表达卡塞特设计对蛋白质重新折叠的重要性.
结论:
- 设计的RBD序列和重新折叠协议使生物活性蛋白质的高效生产成为可能.
- 高结合亲和力证实了其作为治疗开发目标的潜力.
- 这项工作为设计针对RBD的新型COVID-19抗病毒策略提供了基础.
