光以生命周期为基础的FAST标记细胞区分的分离

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 显微镜技术的使用方法
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 光寿命成像显微镜 (FLIM) 通过根据光寿命分离光物种来实现多重复合.
• 之前的方法使用合成探头,光蛋白或自标签标签用于FLIM多重复合.
• 在活细胞中区分共同局部化的光标签仍然是一个挑战.

研究的目的:

• 在FLIM中实施素激活蛋白 (FAST) 技术的协议,以加强细胞隔离.
• 用光寿命来证明FAST-化物复合体在同一光谱通道内区分信号的能力.
• 提供一种用户友好的方法,可视化活哺乳动物细胞中重叠的细胞结构.

主要方法:

• 利用工程设计的FAST点突变变体来结合原HBR-2,5-DM.
• 工程 FAST 变体和素复合体具有相似的蛋白质大小 (~14 kDa) 和可比的光学特性.
• 用局部化信号表达FAST变异以准特定的细胞区 (细胞核和细胞骨).
• 采用光寿命测量来区分FAST-素复合物,这些复合物表现出不同的光衰变动力.

主要成果:

• 快速的化物复合体显示了单指数的光衰变动力学和不同的光寿命.
• 在绿色发射通道 (~500-550 nm) 中,对于共同定位或空间重叠的标签实现了强大的信号分离.
• 该协议成功地在活哺乳动物细胞中区分了核和细胞骨标签.
• 该方法适用于分离其他重叠的部分,如核/戈尔吉或线粒体/细胞骨.

结论:

• 与FLIM相结合的FAST蛋白技术为活细胞中的多重成像提供了一种强大的方法.
• 该协议提供了一种简单的方法来解决重叠的光信号,而不需要编码技能.
• 该技术通过使多个标签的精确空间定位提高了研究细胞结构和动态的能力.