通过高度敏感的下一代测序来非侵入性地确定胎儿血型的验证方法

科学领域:

• 遗传学 是一个遗传学.
• 免疫学 免疫学 免疫学
• 孕产妇和胎儿医学 孕产妇和胎儿医学

背景情况:

• 孕前干预对于有胎儿和新生儿非免疫性血小板缺血 (FNAIT) 或胎儿和新生儿血液溶解性疾病 (HDFN) 的孕妇至关重要.
• 建议使用非侵入性产前诊断程序 (NIPD) 进行胎儿血型基因定型.
• 虽然RT-PCR用于胎儿RHD的确定,滴滴数字PCR (ddPCR) 和下一代测序 (NGS) 首选用于单基替代以尽量减少假阴性. 此外,NGS还允许对无细胞胎儿DNA (cffDNA) 分数进行确定,尽管检测验证标准缺乏.

研究的目的:

• 为了验证下一代测序 (NGS) 的非侵入性胎儿血型基因定型,专注于常见的血小板和红细胞抗原.
• 确定测试验证参数,包括检测限度 (LOD),量化限度 (LOQ) 和胎儿分数评估.
• 与确认性新生儿检测相比,评估NGS的准确性和可靠性.

主要方法:

• 设计了一个定制的原始面板,针对常见的血小板 (HPA-1a) 和红细胞 (K) 抗原,以及单核酸多态 (SNP) 内部控制.
• 使用半导体测序进行了基于AMPLICON的NGS测序.
• 试验验证包括使用健康捐赠者的无细胞DNA (cfDNA) 来确定LOD,LOQ,线性和试验间变异,随后对来自孕妇的23个诊断样本进行分析.

主要成果:

• NGS证明了检测HPA-1a和K等位基因的可行性,低至1%的等位基因频率.
• 在健康的捐赠者中,错误阳性抗异位基因被检测到最多为0.25%.
• 确定了HPA-1a和K的LOD和LOQ,与新生儿血液样本相比,在21例中15例中观察到100%的一致性. 中位数的胎儿分数为11.03%.

结论:

• 下一代测序 (NGS) 是一种准确可靠的方法,用于非侵入性的胎儿血型基因组.
• 使用健康捐赠者的内部验证对于确定LOD,LOQ和灵敏度等测试参数是有效的.
• 设定1%的值为父亲遗传的胎儿HPA-1a和KEL*01.01等位基因 (需要2%的胎儿分数) 确保了可靠的结果,强调了胎儿分数评估内部控制的重要性,以防止虚假负面.