使用HILO显微镜成像和基因工程来量化活细胞中相分离的冷凝物质的协议
Axel Espinoza1, Steven Ingersoll2, Xiaojun Ren3
1Department of Integrative Biology, University of Colorado Denver, Denver, CO 80217-3364, USA.
STAR protocols
|October 18, 2025
概括
这项研究引入了一种新的方法来测量表观遗传因素如何通过活细胞的相位分离聚集. 该协议使用先进的显微镜和遗传工具来可视化和量化基因组组织的这一关键过程.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 分子生物学分子生物学
- 遗传学 遗传学 是一个
背景情况:
- 表观遗传因素在基因调节和基因组组织中发挥着关键作用.
- 通过相位分离来对这些因素进行空间聚类是一种新兴的机制.
- 量化活细胞中的这种相分离能力对于理解其生物学意义至关重要.
研究的目的:
- 提出一种用于量化活细胞内表观遗传因子相分离能力的新方案.
- 为了能够详细分析表观遗传因素的行为及其对基因组组织的影响.
主要方法:
- 使用高度倾斜和层叠光学板 (HILO) 显微镜进行高分辨率成像.
- 采用CRISPR-Cas9基因编辑来生成一个专门的细胞系.
- 包含CRE-LoxP或dTAG诱导的降解系统,用于对融合蛋白进行受控的操纵.
- 开发成像和分析程序以量化相位分离.
主要成果:
- 该协议成功地允许实时可视化和量化表观遗传因子相位分离.
- 生成的细胞系能够精确控制融合蛋白水平及其随后的相分离行为.
结论:
- 该协议为研究表观遗传因素的生物物理性质提供了一个强大的方法.
- 它为研究相分离在转录调节和维持基因组架构中的作用开辟了新的途径.


