针对CUL3基因中cis元素的定向修改,以恢复外9的含入,用于治疗戈登综合征

科学领域:

• 遗传学和分子生物学
• RNA剪接机制的机制
• 治疗目标识别 治疗目标识别

背景情况:

• 库林3 (CUL3) 基因的致病变体主要影响到外子9拼接受体位,导致外子跳转和戈登综合征.
• 拼接部位完整性在预防遗传疾病中的关键作用需要开发针对拼接的治疗方法.

研究的目的:

• 在CUL3基因中识别和描述用于调节替代拼接的通用治疗标.
• 调查这些目标恢复戈登综合征正常拼接模式的机制.

主要方法:

• 生物信息预测和小基因测试以确定潜在的结合调节元素.
• 电泳运动转移试验 (EMSA) 和RNA免疫沉 (RIP) 用于研究蛋白质-RNA相互作用.
• 编辑CRISPR/Cas9基因以创建突变细胞系以进行功能验证.

主要成果:

• 在8的多聚胺通道内确定了三个新的救援地点:A(-9)T,A(-10)T和AA(-9, -10)TT.
• 通过扩展聚皮里米丁通道和改善U2AF2结合,AA(-9, -10) TT修改显著增强了外体9的含有.
• 之前确定的A18G变异被证实可以通过减少细胞模型中hNRNP A1介导的拼接抑制来挽救exon 9跳转.

结论:

• 已识别的AA-9, -10) TT和A18G变种显示出与CUL3相关的戈登综合征的显著治疗潜力.
• 针对性地修改 cis 调节元件,为开发用于拼接相关遗传疾病的治疗方法提供了一个可行的和通用的战略.