培养基和发酵过程对rh-GCSF的重新折叠和净化的影响

科学领域:

• 生物技术是生物技术.
• 蛋白质工程是指蛋白质工程.
• 生物工艺工程 生物工艺工程

背景情况:

• 重组人粒细胞殖民地刺激因子 (rh-GCSF) 对于治疗化疗诱导的中性质衰竭至关重要.
• 大肠杆菌 (E. coli) 是 rh-GCSF 生产的常见宿主,但过度生产往往导致细胞质纳入体 (IBs).
• 从IB中高效地重新折叠和净化rh-GCSF对于治疗应用至关重要,并且严重依赖表达和发酵策略.

研究的目的:

• 研究不同培养基和发酵过程对E. coli中以IBs形式产生的rh-GCSF重新折叠和净化的影响.
• 为了比较纯化rh-GCSF的质量属性与商业参考标准 (Neupogen®和PDgrastim).

主要方法:

• 大肠杆菌菌株在不同的发酵条件下 (例如,食批量) 使用各种介质 (例如,M9) 进行培养.
• 含有rh-GCSF的纳入体被收获,重新折叠和净化.
• 纯化的rh-GCSF被分析使用西式斑点,尺寸排除色谱 (SEC) 和反相高性能液体色谱 (RP-HPLC).
• 还评估了内毒素水平.

主要成果:

• 所有经过测试的表达和发酵策略都成功地重新折叠和净化了rh-GCSF,达到90%以上的纯度.
• 与料批发发酵相结合的M9介质产生了最高的rh-GCSF回收百分比.
• 这种最佳条件也产生了最终的rh-GCSF产品中最高纯度和最低内毒素含量.

结论:

• 培养基和发酵过程的优化显著影响了由大肠杆菌包容体产生的rh-GCSF的产量,纯度和内毒素水平.
• M9介质和食批量培养代表了生产高质量的治疗用途的rh-GCSF的优越策略.
• 这些发现为可扩展和具有成本效益的rh-GCSF制造提供了宝贵的见解.