一个多重的RPA-CRISPR/Cas12a平台,用于快速而准确的Clostridium perfringens的毒素类型

科学领域:

• 食品安全和微生物学
• 分子诊断学 分子诊断学
• 生物技术是生物技术.

背景情况:

• 杆菌是全球食物传播疾病的主要原因之一.
• 准确和快速的毒素类型确定对于控制C. perfringens的爆发至关重要.
• 现有的方法可能缺乏广泛监控所需的速度或可访问性.

研究的目的:

• 为快速和全面的C. perfringens毒素类型化开发一个综合平台.
• 为了实现对关键毒素基因的同时检测,以进行准确的菌株歧视.
• 为食品安全监测提供现场部署的解决方案.

主要方法:

• 开发了一种多重重组合聚合酶放大 (RPA) 试验,与CRISPR/Cas12a检测相结合.
• 同时发现了六个C. perfringens毒素基因 (cpa,cpb, etx,iap,cpe,netB).
• 使用净化DNA和自然污染的食品样本验证了测试结果,并将其与qPCR进行了比较.

主要成果:

• 在C. perfringens-multiplex RPA-CRISPR/Cas12a试验中,检测到≤10个副本/μL,具有高特异性.
• 成功区分了所有七种C. perfringens毒素型 (A-G).
• 在食品样本中识别C. perfringens类型方面,商业qPCR套件的表现优于食品样本,结果在50分钟以下即可获得.

结论:

• 开发的测定方法提供了一个快速,灵敏,特定和具有成本效益的C. perfringens毒素定型方法.
• 该平台适合在资源有限的环境中进行分散的监控和医疗点测试.
• 这项技术显著提高了全球食品安全监测和疫情控制的能力.