准备玻璃化哺乳动物细胞用于in situ冷电子断层扫描
Eva Martin-Solana1,2, Sonia Frendi1,2, Jiying Ning1,2
1Department of Psychiatry, University of Pittsburgh, Pittsburgh, Pennsylvania.
Current protocols
|October 28, 2025
概括
一个新的协议通过在电子显微镜网格上有效培养和玻璃化哺乳动物细胞以实现高分辨率成像,简化了现场冷电子断层扫描 (cryo-ET) 的样本准备.
科学领域:
- 细胞生物学 细胞生物学
- 显微镜的使用方法
- 生物物理学的生物物理.
背景情况:
- 在现场冷电子断层扫描 (cryo-ET) 在接近本地条件下提供高分辨率的细胞3D成像.
- 目前的冷ET方法需要特定于细胞类型的样本准备协议.
- 在电子显微镜 (EM) 网上有效培养和玻璃化哺乳动物细胞对于冷ET至关重要.
研究的目的:
- 开发一种可通用的协议,用于准备哺乳动物细胞用于in situ冷ET.
- 为了简化培养和玻璃化过程,在EM电网上将不朽和原始哺乳动物细胞进行培养和玻璃化.
主要方法:
- 开发了一项协议,用于直接在EM电网上培养附着哺乳动物细胞.
- 该协议包括一个玻璃化过程,以在玻璃冰中冷保存细胞.
- 使用INS-1E细胞 (大鼠胰腺β细胞系) 和初级人类纤维细胞来验证该协议.
主要成果:
- 该协议有助于有效地将附着的哺乳动物细胞应用和培养到EM网格上.
- 成功地实现了培养细胞的玻璃化,将它们保存在玻璃体冰中进行冷-ET.
- 该方法适用于不朽化和初级哺乳动物细胞类型.
结论:
- 该协议提供了一种简化和可通用的方法,用于准备哺乳动物细胞样本以进行in situ冷ET.
- 开发的方法可以在接近本地条件下的细胞进行高分辨率成像.
- 这促进了冷ET在细胞生物学研究中的更广泛应用.
