为检测禽流感而优化循环介导同热放大
Anastasia Glazunova1, Timofey Sevskikh1, Dmitry Kudryashov1
1Federal Research Center for Virology and Microbiology, Academician Bakoulov Street, bldg. 1, Petushki Area, 601125 Volginsky, Vladimir Oblast, Russia.
Animals : an open access journal from MDPI
|October 29, 2025
概括
优化的循环介导同热放大 (LAMP) 试验提供了快速的,可在现场部署的禽流感病毒 (AIV) 检测. 这些测试具有与PCR相比的灵敏度和特异性,有助于早期疾病监测.
科学领域:
- 兽医病毒学 兽医病毒学
- 分子诊断学 分子诊断学
- 公共卫生 公共卫生
背景情况:
- 禽流感病毒 (AIV) 在家禽中造成重大经济损失,并构成动物感染风险.
- 当前的黄金标准诊断,如实时PCR,在资源有限的现场设置中通常是不切实际的.
- 快速的现场诊断工具对于有效的AIV监测和控制至关重要.
研究的目的:
- 开发和验证优化的循环介导同热放大 (LAMP) 协议,用于在采样地点直接检测AIV.
- 将反向转录集成到LAMP反应中,以简化工作流程.
- 评估开发的LAMP试验的分析灵敏度和特异性.
主要方法:
- 实时RT-LAMP和色度LAMP试验的优化,针对AIV的保存的M基因.
- 从科学文献中使用先前存在的原料集.
- 使用等离子体标准进行分析灵敏性测试,用于各种度范围 (10^6-10^0副本/μL).
- 针对27个AIV菌株 (H1-H12) 和常见的异质鸟类病毒的小组进行特异性评估.
主要成果:
- 使用SYBR绿色的实时灯显示了100%的分析灵敏度 (检测极限:Ct = 38).
- 颜色测量LAMP测定 (使用红色,马拉绿色或) 达到91.67%的灵敏度 (检测极限:10^2等离子体副本,Ct = 32).
- 两种优化的LAMP测定都没有与经过测试的异质鸟类病毒呈现交叉反应,证实了高特异性.
结论:
- 优化的LAMP协议为PCR在现场条件下进行AIV检测提供了敏感和特定的替代方案.
- 这些测定需要最小的设备,使得在采样地点的快速选.
- 开发的LAMP方法显著提高了早期艾滋病毒检测和流行病监测能力.
