一个高度敏感的基于BRET的记者,用于活细胞检测HIV-1蛋白酶活性和抑制剂查
Matteo Centazzo1, Atalie Verra-Victoria Djossou1, Silvia Pavan1
1Department of Molecular Medicine, University of Padua, 35121 Padova, Italy.
Viruses
|October 29, 2025
概括
研究人员开发了基于生物发光共振能量转移 (BRET) 的新型报告器,以同时监测人类免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 蛋白酶活性和细胞活力. mNG-p2/p7-NLuc报告员在活细胞中对抗病毒药物查表现出优越的灵敏度.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 病毒学 病毒学
背景情况:
- 病毒蛋白酶 (PRs) 对于病毒复制至关重要,并且是抗病毒疗法的关键标.
- 目前用于PR抑制剂的体外测定有局限性,包括缺乏细胞背景,无法评估细胞透性,毒性和细胞内化合物激活.
研究的目的:
- 开发新的基于细胞的报告器,同时监测人类免疫缺陷病毒-1 (HIV-1) 蛋白酶活性和细胞活力.
- 建立一个更具生理相关性的平台,用于选针对HIV-1的抗病毒化合物.
主要方法:
- 开发两种基于生物发光共振能量转移 (BRET) 的报告器,使用不同的BRET对 (RLuc/YFP和NLuc/mNG),由HIV-1 p2/p7裂变部位连接在一起.
- 评估报告员灵敏度,能量传输效率和光谱特性.
- 应用最敏感的报告器 (mNG-p2/p7-NLuc) 来评估蛋白酶抑制剂对HIV-1 PR活性和活细胞细胞活性的影响.
主要成果:
- 两位BRET记者都特别检测到了HIV-1 PR活动.
- mNG-p2/p7-NLuc报告员表现出更高的灵敏度,增强的能量传输和优异的光谱分离,导致显著更高的BRET比率.
- 在mNG-p2/p7-NLuc报告员成功量化了蛋白酶抑制剂对HIV-1 PR活性和细胞活性的影响.
- 已知HIV-1PR抑制剂的效力是准确地使用该报告员系统测量.
结论:
- mNG-p2/p7-NLuc报告器是一种敏感且有效的基于细胞的工具,用于评估HIV-1 PR活性和抑制剂疗效.
- 这种双读报道系统为在生理相关条件下发现和查抗病毒药物提供了一个有价值的平台.
