一个TtAgo介导的LAMP系统用于在儿科腹样本中高度敏感和特定检测轮状病毒
Ligong Wang1, Linlin Fan1, Dan Wang1
1Department of Clinical Laboratory, The First Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University, Xi'an, Shaanxi, China.
Frontiers in cellular and infection microbiology
|October 29, 2025
概括
一个新的轮状病毒诊断测试结合了反转录循环介导的同热放大 (RT-LAMP) 和热 (Thermus thermophilus Argonaute) (TtAgo) 进行准确的检测. 这种方法实现了高灵敏度和特异性,改善了儿童的轮状病毒诊断.
科学领域:
- 分子生物学分子生物学
- 病毒学 病毒学
- 诊断 诊断 诊断 诊断
背景情况:
- 罗塔病毒是全球严重的儿科胃肠炎的主要原因.
- 准确和快速的轮状病毒诊断对于患者管理和疫情控制至关重要.
- 传统的循环介导同热放大 (LAMP) 试验可能会由于非特异性放大而产生假阳性.
研究的目的:
- 开发一种高度敏感和特定的轮状病毒检测试验.
- 改进现有的基于LAMP的轮状病毒诊断方法.
- 为了将Thermus thermophilus Argonaute (TtAgo) 介导的探针切割整合到一个反转录LAMP (RT-LAMP) 试验中.
主要方法:
- 开发了一种针对轮状病毒NSP5基因的新型RT-LAMP试验.
- 集成的TtAgo介导导向DNA导向探头切割,用于信号生成.
- 使用合成RNA和临床儿科便样本验证了试验,并将其与RT-qPCR,经典LAMP和基于抗原的方法进行比较.
主要成果:
- 在TtAgo介导的RT-LAMP试验中,在60分钟内检测到只有10副本/μL的轮状病毒RNA.
- 该试验在临床样本中显示了100%的灵敏度和特异性 (n=60),没有对其他病原体的交叉反应.
- 在ROC分析中达到1.00的曲线下面积 (AUC),显著超过经典LAMP (AUC=0.80).
结论:
- 整合TtAgo显著提高了基于LAMP的轮状病毒检测的准确性和可靠性.
- 这种TtAgo介导的RT-LAMP测定为敏感和特定的轮状病毒诊断提供了一种实用,实验室准备的分子工具.
- 改进的诊断性能有望改善轮状病毒患者管理和公共卫生监测.
