设计了CRISPR-Cas9载体,用于有效地通过农细菌介导的Phanerochaete chrysosporium的转化
Simran Jatwani1, Falguni Aggarwal1, Rishabh Rajkumar Jadhav1
1Department of Biotechnology, School of Engineering and Applied Sciences, Bennett University, Tech Zone II, Plot Nos. 8-11, Greater Noida, U.P., India.
Molecular biotechnology
|October 30, 2025
概括
我们优化了Phanerochaete chrysosporium的Agrobacterium介导的转化,这是一种具有高素降解能力的真菌. 这一突破使得基因工程能够用于可持续的生物产品.
科学领域:
- 菌类学 菌类学是指菌类学.
- 生物技术是生物技术.
- 合成生物学 合成生物学
背景情况:
- 帕纳罗切特是白色腐烂的真菌,具有显著的解能力.
- 由于转化效率低,对P. chrysosporium的基因操纵受到阻碍.
研究的目的:
- 为Phanerochaete chrysosporium开发一个优化的Agrobacterium介导转化 (AMT) 协议.
- 建立功能性基因组编辑和P. chrysosporium中的代谢工程的基础.
主要方法:
- 修改一个具有sGFP记者基因的CRISPR-Cas9兼容二元向量.
- 使用菌根盘和三明治选择方法进行转化.
- 优化共同种植参数,包括温度和添加乙酸.
主要成果:
- 实现了携带抗胺素和sGFP基因的T-DNA的稳定整合.
- 确定了低温化 (23°C) 和乙酸作为提高转化效率的关键因素.
- 在转变的P. chrysosporium mycelia中确认了sGFP的稳定表达.
结论:
- 开发的AMT协议显著提高了P. chrysosporium的转化效率.
- 这项研究提供了基于Cas9的载体和异质基因表达的稳定维护的概念证明.
- 这种优化的协议对于推进P. chrysosporium的代谢工程至关重要,用于素价值化和可持续生物化学生产的应用.


