一种强大的ddPCR试验,用于在肝细胞癌液体活检中绝对量化miR-192-5p
Xinmiao Liu1, Yefan Zhang2, Narisu Narisu3
1Department of Clinical Laboratory, State Key Laboratory of Molecular Oncology, National Cancer Center/National Clinical Research Center for Cancer/Cancer Hospital, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing, China.
Clinical chemistry and laboratory medicine
|October 30, 2025
概括
这项研究开发了一种使用锁定核酸 (LNA) 探针的超敏感滴滴数字PCR (ddPCR) 方法,用于在液体活检中量化microRNA-192-5p. 新的测定方法在与其他生物标志物相结合时,可以改善肝细胞癌 (HCC) 的检测.
科学领域:
- 生物化学 生物化学
- 分子生物学分子生物学
- 在瘤学瘤学.
背景情况:
- 微RNA-192-5p是一种肝脏特异的微RNA,在肝细胞癌 (HCC) 中降低调节.
- 检测低丰富度的血microRNAs用于HCC诊断是具有挑战性的.
- 现有的方法缺乏临床应用所需的灵敏度和标准化.
研究的目的:
- 开发一种超敏感且标准化的方法,用于在液体活检中量化microRNA-192-5p.
- 克服检测低丰度血微RNA的技术挑战.
- 评估微RNA-192-5p在HCC中的诊断潜力.
主要方法:
- 开发了一种滴滴数字PCR (ddPCR) 试验,使用锁定核酸 (LNA) 修饰的探针来增强目标杂交.
- 根据MIQE的指导方针,选和优化了原料和探头组合.
- 验证了试验的分析性能,包括真实性,精度,灵敏度和线性范围.
- 分析了来自HCC患者和健康对照者的血样本,并评估了结合miR-192-5p与AFP和AFU的物流模型.
主要成果:
- 经过LNA修改的探头显著改善了正滴滴计数.
- 与RT-qPCR相比,ddPCR测定显示出极好的精度和真实性.
- 已建立的敏感检测极限 (LoB=1.75,LoD=3.33,LoQ=13.45副本/μL) 和广泛的线性范围.
- 与对照组相比,HCC患者的miR-192-5p水平显著降低 (p<0.001).
- 结合miR-192-5p,AFP和AFU的多标志物流模型实现了0.88的AUC,超过了单个生物标志物.
结论:
- 对LNA优化的ddPCR测定有效地解决了miRNA液体活检分析的局限性.
- 组合生物标志物模型为准确的HCC诊断提供了一个有前途的临床工具.
- 标准化工作流程确保了测试可重复性,为多中心验证研究铺平了道路.
