使用在培养细胞中的功能化纳米体对内细胞运输的活细胞成像

科学领域:

• 细胞生物学 细胞生物学
• 分子生物学分子生物学
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 细胞内核对细胞平衡和蛋白质贩运至关重要.
• 监测跨膜蛋白质的运输对于理解细胞功能至关重要.
• 目前用于追踪蛋白质贩运的现有方法存在局限性.

研究的目的:

• 建立一个多功能工具包,用于调查内细胞吸收和逆行蛋白质贩运.
• 开发功能化纳米体,用于监测从细胞表面到跨戈尔吉网络 (TGN) 的传输.
• 为产生和利用这些纳米体提供一个方法框架.

主要方法:

• 针对GFP或mCherry标签的功能化纳米体的开发.
• 利用纳米体进行活细胞成像,电子显微镜和定量测试.
• 产生表达GFP标记的跨膜记者的稳定细胞系.
• 使用VHH-mCherry纳米体来分析转移素受体 (TfR) 和阴离子依赖的曼诺-6-酸盐受体 (CDMPR) 的吸收.

主要成果:

• 证明功能化纳米体与记者蛋白平行地内化和贩运.
• 通过光显微镜和实时成像成功追踪逆行运输.
• 在电子显微镜中使用ascorbate peroxidase 2 (APEX2) 解决了超结构定位.
• 使用氨酸硫化基因量化评估TGN到达动力学.

结论:

• 开发的纳米体工具包为研究内细胞通路提供了一种多功能方法.
• 这种方法允许精确监测从细胞表面到TGN的蛋白质贩运.
• 该工具包促进了了解细胞平衡和生理过程的进步.