工作流程 使用冷巧合光,电子和离子束显微镜进行细胞的有针对性的研磨

科学领域:

• 细胞和分子成像技术
• 相对光和电子显微镜相对光和电子显微镜.
• 低温电子显微镜样品准备 样品准备

背景情况:

• 用扫描电子显微镜 (CryoFIB-SEM) 进行低温聚焦离子束研磨是为 CryoET 准备细胞层的标准.
• 将光显微镜集成到CryoFIB-SEM中有助于目标定位,但通常会受到错误对齐的焦点平面的影响,从而阻碍准确的准.
• 现有的方法需要图像注册,这可能缺乏定位小或罕见细胞结构的精度.

研究的目的:

• 使用新型成像平台开发一个改进的CryoFIB-SEM样本准备工作流程.
• 为了实现同时进行光成像和离子束研磨,以精确,实时地准细胞结构.
• 为了提高特定亚细胞点的CryoET的乳片制备的准确性和成功率.

主要方法:

• 开发一个定制的三合一成像平台,用于同时进行光学和离子束显微镜.
• 在聚焦离子束研磨过程中实现实时光反.
• 应用工作流来准玻璃化巨细胞中的微管组织中心 (MTOC).

主要成果:

• 在化巨细胞中准MTOC的成功率>60%.
• 通过控制的削终止,证明了光标记结构的保存.
• 使用随后的冷电子断层扫描和相关光和电子显微镜验证了工作流.

结论:

• 三重巧合成像平台显著提高了CryoFIB-SEM期间针对特定细胞结构的准确性.
• 实时光反对于保存标记目标和优化CryoET的叶片质量至关重要.
• 这种工作流提高了相关光和电子显微镜用于高分辨率细胞成像的能力.