在体外和活细胞中研究冠状病毒M^pro二分化的一种分裂光酶系统

科学领域:

• 生物化学 生物化学
• 病毒学 病毒学
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 主蛋白酶 (Mpro) 对于冠状病毒复制至关重要,其功能是同位体.
• 由于现有方法和测试的挑战,研究Mpro二分化是很困难的.

研究的目的:

• 开发一种定量生物传感器,用于测量活细胞和体外SARS-CoV-2 Mpro二分化.
• 调查Mpro二分化,蛋白质分解活性和抑制剂结合之间的关系.

主要方法:

• 一个基于 luciferase 的生物传感器是通过将 SARS-CoV-2 Mpro 与 luciferase 片段 (LgBiT 和 SmBiT) 融合而设计的.
• 在细胞和纯化的蛋白质中量化了生物传感器的二分化依赖的发光.
• 分析了来自其他冠状病毒的催化不活跃的Mpro突变体和Mpro酶.

主要成果:

• 生物传感器以剂量依赖的方式准确报告Mpro二分化,需要保存二分化接口残留物.
• 蛋白质分解活性对Mpro二分化不必;一种催化不活跃的突变体显示了增强的二分化.
• 该系统检测到抑制剂促进的二分化,与共价抑制剂,如nirmatrelvir增加发光.

结论:

• 一种新的,定量化的Mpro二分化生物传感器已成功开发出用于细胞和体外应用.
• Mpro二分化独立于其催化活性,并且在冠状病毒中有机械性保存.
• 性Mpro抑制剂以全性方式稳定二元复合物,这表明其双重作用机制.