在肝细胞癌中基于细胞内和表面标记器检测循环瘤细胞的固定兼容的协议
Boqun Zhu1, Kanako Yoshida2, Harry Luu1
1Department of Gastroenterology and Hepatology, Johns Hopkins University School of Medicine, Baltimore, MD, USA.
Scientific reports
|November 7, 2025
概括
固定样本用于流细胞计,可以在肝细胞癌 (HCC) 循环瘤细胞 (CTC) 中检测细胞内标记物. 这种可靠的方法改善了CTC分析,并识别了瘤特异性突变,克服了表面标记物依赖的局限性.
科学领域:
- 在瘤学瘤学.
- 生物技术是生物技术.
- 分子诊断学 分子诊断
背景情况:
- 在肝细胞癌 (HCC) 中,循环瘤细胞 (CTC) 检测面临挑战,原因是CTC的稀有性和依赖于像EpCAM这样的可变表面标记物.
- 检测细胞内标记物至关重要,但在流动细胞计测中受到固定/透问题的阻碍,导致细胞损失和表皮损伤.
研究的目的:
- 评估使用固定样本用于流细胞计检测肝细胞癌 (HCC) 循环瘤细胞 (CTC) 的可行性.
- 评估样本固定和储存对CTC细胞内和表面标记物检测的影响.
- 为了验证固定CTC样本工作流程在HCC患者分子分析的临床实用性.
主要方法:
- 使用HepG2细胞,外围血液单核细胞 (PBMCs) 和HCC患者CTCs进行流细胞计的固定协议的系统评估.
- 在短期 (4°C) 和长期 (-80°C) 储存后,对固定样本和新鲜样本的细胞内和表面标记物染色性能进行评估.
- 临床验证包括从固定的HCC患者样本中检测CTC衍生DNA的CTC检测和突变分析 (CTNNB1).
主要成果:
- 固定使可靠的细胞内染色成为可能,而不会影响在流细胞计中检测表面标记物.
- 固定样本,特别是未冷的样本,显示出与新鲜样本相比的染色,细胞恢复率仅降低了7-10%.
- 在使用固定样本的HCC患者中成功检测CTC,并确定CTC衍生DNA中的瘤特异性CTNNB1突变.
结论:
- 固定的样本工作流提供了一个可靠和实用的方法,用于肝细胞癌 (HCC) 的全面CTC分析.
- 这种方法克服了传统流细胞计的局限性,可以检测细胞内标记物,并促进CTCs的分子亚型.
- 这些发现支持固定CTC的临床应用,以改善HCC的诊断和个性化治疗策略.
