对Mespilus germanica L.多烯氧化酶的亲和色谱研究

科学领域:

• 食品科学 食品科学 食品科学
• 酶学 是一种酶学.
• 生物化学 生物化学

背景情况:

• 多氧化酶 (PPO) 酶催化食物中的酶性化.
• 花果 (Mespilus germanica L.) 是一种有价值的食物来源,具有抗氧化和抗病毒特性.
• 有效净化PPO对于了解其在食品质量和潜在应用中的作用至关重要.

研究的目的:

• 从果中净化和表征多氧化酶 (PPO).
• 开发和应用用于PPO净化的新型亲和力染色法方法.
• 为了确定骨髓PPO的动力性质和亚单元结构.

主要方法:

• 使用同质化和硫酸沉的PPO的部分净化.
• 酶表征包括最佳基质,缓冲区,pH和温度的确定.
• 使用Sepharose 4B-L-tyrosine-p-aminobenzoic acid (S-4B-TABA) 和Sepharose 6B-L-tyrosine-p-aminobenzoic acid (S-6B-TABA) 的亲和凝净化PPO.
• 使用原生PAGE和SDS-PAGE对酶纯度和亚单元结构的分析.

主要成果:

• 甲骨髓PPO与catechol活动的最佳条件被确定为0.1M,pH6.8和15°C.
• 甲基醇的动力参数Vmax和KM分别计算为12,542.46 IU和2.5 mM.
• 实现了高净化度 (54.0对于S-4B-TABA,4.8对于S-6B-TABA).
• 原生PAGE和SDS-PAGE显示出40kDa的单个子单位,表明一种均的酶制剂.

结论:

• 第一次使用S-4B-TABA和S-6B-TABA亲和染色学成功净化了Medlar PPO.
• 这项研究建立了一种新且有效的方法来净化骨髓PPO.
• 有特征的骨髓PPO为食品工业应用和进一步的酶研究提供了宝贵的见解.