强大的校准和量化FRET信号使用多重生物传感器条形码
Jhen-Wei Wu1, Jr-Ming Yang1, Chao-Cheng Chen1
1Department of Pathology, Department of Cell Biology, and Center for Cell Dynamics, Johns Hopkins University, Baltimore, MD 21205, USA.
iScience
|November 10, 2025
概括
我们开发了一种使用光蛋白条形码的校准方法,以使弗斯特共振能量转移 (FRET) 生物传感器信号正常化. 这一策略确保了独立于成像条件的精确FRET效率测量,从而使得活细胞研究更为可靠.
科学领域:
- 活细胞成像成像技术
- 生物物理学的生物物理.
- 分子生物学分子生物学
背景情况:
- 福斯特共振能量转移 (FRET) 对遗传编码的光生物传感器至关重要.
- FRET比率对成像参数敏感,阻碍了准确的数据解释.
- 对于可靠的FRET生物传感器测量,需要进行规范化.
研究的目的:
- 为FRET生物传感器成像开发一个强大的校准策略.
- 为了确保FRET比率独立于成像条件.
- 为了使多重的FRET效率确定.
主要方法:
- 使用基于光蛋白 (FP) 的条形码作为细胞内的校准标准.
- 设计了"FRET-ON"和"FRET-OFF"标准,用于高和低FRET校准.
- 集成的仅供体和仅接受体控制器,用于同时测量FRET效率.
主要成果:
- 校准的FRET比率独立于像刺激强度这样的成像参数.
- 校准策略恢复了互惠的捐赠器和接受器信号变化.
- 能够同时确定多个生物传感器的FRET效率.
结论:
- 引入了一种用于多重FRET生物传感器成像的简单而强大的策略.
- 促进准确的交叉实验和长期FRET研究.
- 提高FRET生物传感器数据的可靠性和可解释性.
