效流的淘汰会最大限度地减少交叉通话,并增强基于转录因子的生物传感器的响应

科学领域:

• 合成生物学 合成生物学
• 生物技术是生物技术.
• 分子生物学分子生物学

背景情况:

• 细胞运输系统影响细胞内分子度,影响基于转录因子 (TF) 的生物传感器响应.
• 效流输出小分子,通过促进连接物扩散,可能会损害生物传感器检测的准确性.
• 基于DmpR的生物传感器检测联体受联体扩散的影响,需要工程来提高信号保真度.

研究的目的:

• 在基于DmpR的生物传感器中设计细胞出口机器,以提高响应能力和减少交叉声交换.
• 为了克服细胞之间的连接物扩散的局限性,并提高信号保真度.
• 为了证明宿主工程对于酶选平台的适用性.

主要方法:

• 淘汰特定的排泄基因 (例如mdtA),以最大限度地减少连接体扩散.
• 使用基于DmpR的生物传感器,采用醇响应的TF来检测细胞内醇配体.
• 应用基于流细胞计的高通量查来识别酶变体.

主要成果:

• 删除mdtA促进了化合物的有效细胞内积累,使生物传感器灵敏度增加了多达19倍.
• 在模拟图书馆实验中,假阳性从野生类型的74%减少到DmdtA菌株的5%.
• 工程生物传感器平台成功识别了具有改善催化活性的青素G乙酶 (PGA) 变体.

结论:

• 主体工程调节细胞条件和连接物度提高了基于单细胞的酶查的灵敏度,精度和效率.
• 通过排泄敲击最小化连接体扩散是一种提高生物传感器性能的多功能策略.
• 这种方法促进了强大的高通量选,用于酶发现和优化.