在肝细胞癌组织中使用基于MTT的冷成像检测代谢活跃细胞

科学领域:

• 在瘤学瘤学.
• 细胞生物学 细胞生物学
• 生物化学 生化学

背景情况:

• 肝细胞癌 (HCC) 包含具有高代谢活性和抗压力的细胞子群.
• 这些细胞驱动瘤的进展和治疗阻力.
• 当前现场可行的细胞检测方法往往会损害组织完整性或在技术上是复杂的.

研究的目的:

• 开发一种简单的,非破坏性的方法,以在HCC组织中实地检测代谢活性细胞.
• 为了使可活的HCC细胞的空间映射,并识别耐治疗的亚种群.

主要方法:

• 利用了依赖于线粒体的MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium化物) 的减少,以形成可活细胞检测的mazan晶体.
• 优化了组织碎片大小,培养条件 (20% FBS,1 mg/mL MTT,3小时化) 和冷解剖参数 (20微米厚,4% PFA 固定,DAPI 反染).

主要成果:

• 使用优化的协议,在5小时内实现了活跃的HCC细胞的空间映射.
• 该方法具有成本效益,不需要专门的设备,并保留组织架构.
• 在HCC组织的表面区域中确定了高活力和抗压细胞群.

结论:

• 开发的协议提供了一个实用的平台,用于在HCC中现场检测和可活细胞的空间映射.
• 能够单细胞分离耐治疗亚种群,以便进一步研究HCC微环境.
• 通过保持组织完整性和细胞活力来解决现有方法的局限性.